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酿酒酵母感受态细胞的制备、转化

发表时间:2019-01-25  |  点击率:1464

接下来喆图小编给大家讲讲酿酒酵母感受态细胞的制备方法:

(1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 ml YPD液体培养基,30℃,250 rpm 培养过夜。

(2)测定过夜培养物的OD600值为3.0~5.0之间。

(3)将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2~0.4。

(4)在28~30℃恒温培养摇床中继续培养3~6 hr,使其OD600值达到0.6~1.0。

(5)于室温1500 g 离心5 min 收集酵母细胞,弃上清。

(6)用10 ml 洗液洗酵母细胞,随后于室温1500 g 离心5 min离 心收集细胞,弃上清。

(7)用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞,以每管50 μl 分装。

接下来是酿酒酵母细胞的转化

(1)取50 μl 感受态细胞,再加入待转质粒各2 μl,混匀。

(2)加入500 μl 转化用溶液(PEG/LiAc,二甲亚砜),弹击管壁混匀。

(3)30℃恒温培养摇床中恒温1 h,隔15min弹击管壁混匀。

(4)加入1毫升YPD培养液,30℃恒温培养摇床中培养1小时。

(5)3500 g 离心5 min ,留沉淀,弃上清。

(6)沉淀用150 μl TE重悬,涂相应的SD平板放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后,再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇,擦干桌面,写实验报告。观察平板上长出的菌落克隆,以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。

以上内容仅供参考,如需了解详情,请联系喆图客服!

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