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用37℃培养箱制备感受态

发表时间:2019-03-26  |  点击率:361

      今天喆图小编来说说在实验中,为了获得纯的重组质粒DNA,需要允许外源DNA分子进入的细胞。经过一些特殊方法处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的细胞,即感受态细胞。

     那么感受态如何制备,喆图小编就来给大家说一说它的基本制备步骤:

    ①、从37℃培养箱中培养16-20 h的平板中挑取一个单菌落(直径2-3 mm),转到一个含有100 ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3 h。一般经验,1 OD600约含有大肠杆菌DH5α 109 个/mL。

    ②、将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50 ml聚丙烯管中,在冰上放置10 min,使培养物冷却至0℃。

    ③、于4℃用Sorvall GS3特头以4 100 r/min离心10 min,以回收细胞。

    ④、倒出培养液,将管倒置1 min以使MAX后的痕量培养液流尽。

    ⑤、每50 ml初始培养液用30 ml预冷的0.1 mol/LCaCl2-MgCl2溶液(80 mmol/L MgCl2,20 mmol/L CaCl2)重悬每份细胞沉淀。

    ⑥、于4℃用Sorvall GS3转头以41 00 r/min离心10 min,以回收细胞。

    ⑦、倒出培养液,将管倒置1 min以使MAX后的痕量培养液流尽。

    ⑧、每50 ml初始培养物用2 ml用冰预冷的0.1 mol/L CaCl2(或TFB)重悬每份细胞沉淀。

    ⑨、此时可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验,也可以将细胞冻存于- 40℃的低温保存箱中。

    以上内容仅供参考如需了解详情请联系喆图客服。

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