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培养细胞时的充分准备

发表时间:2019-03-29  |  点击率:570

      接下来喆图小编就来说说培养细胞时该准备那些东西,包括耗材的处理、试剂的配置,无菌检验等等。

      玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿要先用洗衣粉刷干净,然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水冲洗 8-10 遍,除去残留酸液。瓶子之类,冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎,放于鼓风干燥箱中160℃烘烤 2 h 待用。

      试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。

     无菌检验,主要采用过滤除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等,有些可以采用高压灭菌。

      试剂分装保存,包括营养液、胰酶、血清等。

      血清特别重要,血清必须贮存于 –20℃的低温保存箱中,如果一次无法用完一瓶,可将 40~50ml 分装于无菌酸处理瓶中,甚至置青霉素瓶保存。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。

       瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃ 冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀,使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

       热灭活是指 56℃,30 分钟加热已完全解冻血清。恒温水浴锅升到 56℃后,将血清放入,待温度升高到 56℃ 后计时,一般 5 分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清对细胞的影响。

       实验进行前,超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。

       每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。

       无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应马上拿出。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。

      小心取用无菌实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约 45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

     以上内容仅供参考,如需了解详情请联系喆图客服!

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