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菌种的扩大培养

发表时间:2019-04-02  |  点击率:435

      种子培养期染菌的危害MAX大,因严格防止。一旦发现种子染菌,均应灭菌后弃去,并对种子罐及其管道进行彻底灭菌。发酵前期养分丰富,容易染菌,此时养分消耗不多,应将发酵液补足必要养分后迅速灭菌,并重新接种发酵。发酵中期染菌不但严重干扰生产菌株的代谢,而且会影响产物的生成,甚至使已形成的产物分解。由于发酵中期养分已被大量消耗,代谢产物的生成又不是很多,挽救处理比较困难,可考虑加入适量的抗生素或杀菌剂。如果是发酵后期染菌,此时产物积累已较多,糖等养分已接近耗尽,若染菌不严重,可继续进行发酵;若污染严重,可提钱放罐。染菌程度越重,危害越大;染菌少,对发酵的影响就小。所以喆图小编给大家讲讲实际生产中,应当根据污染程度和发酵时期区别对待。

        1 实验器材与试剂

1.1 器材

热空气消毒箱、超净工作台、振荡培养箱、显微镜、天平、三角瓶、试管、移液管、培养皿、 接种针、平板涂布器、酒精灯、载玻片

1.2 试剂 营养琼脂、葡萄糖、磷酸二氢氨、七水合硫酸镁、氯化钠、磷酸氢二钾、C8H9Cl、蛋白胨、0.4%酚红溶液、蒸馏水、番红染液、香柏油、擦镜液

        1.3培养基

(1)营养琼脂培养基:直接称量营养琼脂粉4.5g,溶于100mL蒸馏水配制,pH7.2,分装到试管中, 灭菌后摆成斜面。

(2)种子培养基:葡萄糖 0.5%、磷酸二氢氨 0.1%、七水合硫酸镁 0.02%、氯化钠 0.5%、磷酸氢二钾 0.1%

(3)葡萄糖酚红肉汤培养基:C8H9Cl 0.3%、蛋白胨 0.8%、 葡萄糖 0.5%、 氯化钠 0.5%、 0.4% 酚红溶液,pH7.2

        2实验方法

2.1种子的扩大培养

2.1.1斜面培养基的配制

配制营养琼脂培养基,分装,灭菌(121℃条件下灭菌 30min),倒斜面。

        2.1.2菌种的活化

⑴将大肠杆菌采用无菌操作的方法接种于斜面上,恒温培养箱37 ℃下培养18h;

⑵培养 18h 后,观察菌落颜色是否一致,若均为黄色,挑取培养皿周边的菌落进行无菌检测;若颜色有黄有白,则两种颜色的菌落均要进行无菌检测。检测方法常用染色镜检,若检测后,没有污染,便可进行扩大培养;若检测到杂菌,要重复上述步骤,直到无菌为止,否则,不能继续下一步操作。

        2.1.3扩大培养

在无菌条件下,从检测后的活化培养基上挑取10个左右菌落,用接种针接种到扩大培养基(即种子培养基)中,于37℃下振荡培16-18h,观察菌落形态。然后配合显微镜形态观察,根据结果来判断能否进行下一步。

        2.2污染的检测和判别

        2.2.1显微镜检查

⑴取样:用无菌操作方式取发酵液少许,涂布在载玻片上;

⑵制片、染色:自然风干后,用番红染液染色 1-2min,水洗;

⑶干燥后用油镜下观察。

2.2.2平板检查

⑴配制营养琼脂培养基,灭菌,倒平板;

⑵取少量待检发酵液经稀释 (大约 10–6~10–7) 后涂布在营养琼脂平板上,在电热恒温培养箱中 37℃下培养 24h;

⑶观察菌落形态。

2.2.3肉汤培养检查法(用于检测培养基灭菌是否彻底)

将1ml待测液(灭菌处理后的种子培养基)接入葡萄糖酚红肉汤培养基中,于37℃下培养24h,观察培养基的状态和颜色。

以上内容仅供参考,需了解详情请联系喆图客服!

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