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用恒温培养箱培养初代细胞

发表时间:2019-04-15  |  点击率:405

     今天喆图小编给大家讲讲初代培养或原代培养,是从供体获取组织后的培养。其蕞大优点是:组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大的变化,具有二倍体遗传性状,在供体来源充分、生物条件稳定的情况下,在一定程度上能反映体内状态。
     合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物,细胞能较快地长成单层。本法尤适用于培养大量组织,细胞产量高;但用于经常性小量培养工作稍显繁琐,无菌操作不良时且易污染。
     首先讲讲实验方法:

     实验材料:试剂、试剂盒 Hanks、培养液、胰蛋白酶
     实验所需仪器、耗材:恒温水浴锅、吸管、平皿、培养瓶、恒温培养箱、烧杯、搅拌器、三角烧瓶、不锈钢筛、眼科剪、眼科镊、计数板、CO2培养箱等等。
      实验步骤:
     1. 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20 分钟;
     2. 布局:点燃煤气灯,安装吸管帽(应通过火焰);

     3. 处理组织:把组织块置入烧杯中,用Hanks液漂洗2~3 次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60 分钟;
     4. 剪切:用眼科剪把组织块切成2~3 毫米大小的块(用手术刀割亦可),以便于消化;加入比组织块总量多30~50 倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞;
     5. 消化:或用恒温水浴锅,或置入37 ℃恒温培养箱中消化均可,消化中每隔20 分钟应摇动一次;消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定;
     6. 分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,马上终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块;低速离心消化液5 分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液;
     7. 计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中;对大多数细胞来说,pH 要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说胆液体变酸,可用NaHCO3调整;
     8. 培养:置入36.5 ℃恒温培养箱中培养;如果用CO2培养箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽(松口)堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需更换新塞。
注意事项:
     9. 组织块、胰蛋白酶、培养液等易受紫外线伤害的物品,*在培养时再携入操作野;如预先置入,需用纸张覆盖,以免受射线影响;开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

     以上内容由喆图小编编辑发布,如需了解详情请联系喆图客服!

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