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生化培养箱制作菌种的详细的操作

发表时间:2019-06-10  |  点击率:354

        此刻逐渐随着食用菌产业的快速发展,各行业的菌种需要量就慢慢随之增加,而目前我国菌种出产单元明显是有点少了,许多菇农不得不向外引种。但不说长途购运菌种不仅花费大,成本高而且菌种如果因破瓶而易引起杂菌污染,从而也会严重影响栽培食用菌的经济效益。菇农若能掌握菌种出产程序和制种技术,实行自行制种,逐步发展成制种专业户,也是一项很好的致富道路。菌种出产程序,通常分为母种、原种和栽培种3个层次,也就是通常所说的一级、二级、三级菌种。此中母种的分离选育技术性强,要求精化;而原种和栽培种的制作则比较简单。下面就由中药标准对照品研究中心给各位推荐各级菌种的制作技术。
        一、母种的分离选育母种主要采用人工抉择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。作为一般制种专业户,可以采用人工抉择方式分离培育母种,具体步骤与操作方法如下。
        1、采集种源从野生成人工栽培群体中,抉择有代表性的优良菇体作为种源。种菇的标准是:八成熟,朵形圆正、肉质肥厚,无病虫害。采集1--2朵符合上述标准的种菇编上号码,作为分离母种的材料。从栽培室采集的应标有原菌株代号。
        2、培养基配制琼脂培养基又叫PDA培养基,常用配方为:马铃薯200--250克,琼脂15--20克,葡萄糖20--25克,清水1000毫升。也可以加硫酸镁1--1.5克,维生素B1微量,磷酸二氢钾2--3克。先将马铃薯洗净去皮,切成薄片,置于铝锅内加水煮沸30分钟,捞起后用4层纱布过滤,取汁。然后将琼脂到场汁内,边加热边搅拌,让琼脂充分溶化;再将葡萄糖等到场,稍煮几分钟后,同样用4层纱布过滤,取其汁液。将汁液趁热装入玻璃试管内。装至管长的1/5,管口用棉花塞紧,或将汁液装入玻璃三角瓶内,装量20毫升。然后置于高压锅内,在98--108千帕/厘米的压力下灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出,趁热将试管斜排于桌上,冷却后即成为固体斜面培养基。
        3、母种分离方法有孢子弹射、组织分离和基内分离3种方法。①孢子弹射法。将种菇表面消毒,吸干水分后,将菇体悬挂于装有琼脂培养基的三角瓶内,让菇体内的袍子自然散落在培养基上萌发菌丝。也可以剪取一小决菇体,贴附在试管斜面培养基表面,让孢子散落在培养基上萌发菌丝,即能获得母种;③组织分离法。将消毒过的种菇,在接种箱内用手从菇柄处对半解开,或用刀片切开,使菇体形成对开。在菌盖和菌柄交界处或菌褶处,用接种刀切取一小块菇体,然后纵切成5毫米x10毫米的小薄片,用接种针挑取一块薄片,接入斜面培养基的中央,每支试管接种一小决薄片,待其萌发菌丝,即可得到母种;(3)基内分离法。抉择已长菇的木段,削去树皮及表层木质部,用70%的酒精消毒后,锯成1厘米厚的薄片,放入0.1%的 HgCl2水中消毒1--2分钟,再用灭菌水洗去残液。然后再将小薄片劈成0.5--1厘米宽的小条,接入斜面培养基中央,待长出菌丝后即得母种。也可以在已长菇的菌袋中,经消毒处理后,用接种针钩取袋内色泽纯、长势旺的菌丝体,接种在试管斜面培养基中央,待萌发菌丝后,同样获得菌种。
        4、适温培养通过上述不同方式将菌种分离接种于试管后,要及时将试管移入已消毒的培养箱或培养室内培养,温度控制在25℃左右,使分离获得的孢子或菌丝在适温下发育。
        一般孢子弹射3--4天后孢子萌发成菌落,10天后菌丝长满管;组织分离接种后2--3天,菌丝即萌发,并在培养基上蔓延生长;菇木分离接种后,7天菌丝即恢复生长。
        5、选育提纯通过上述方法得到的菌丝,不一定都是的,还需要选育提纯。因此,在菌丝萌发后,要当真观察,挑选色泽纯、健壮、长势正常、无间断的菌丝,在接种箱内连同培养基钩取菌丝,接入另备的试管培养基上。在生化培养箱23--25℃的恒温条件下,培养7--10天,待菌丝长满管后,再进行观察,从中择优取用,即为“母代”母种。
        6、转管扩接母代母种可以转管扩接成“子代”母种。采用同样的斜面培养基,每支可扩接30--50支子代母种。出产上供应的多为子代母种。它可以再次转管扩接。一般每支可扩接成20--25支子代母种,但转管次数不得超过5次。

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