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植物的组织培养

发表时间:2019-11-28  |  点击率:322

   按照所配培养基的要求,从各母液只能感取出大量元素、微量元素、铁液、维生素、激素、蔗糖等,置于容量瓶中定容至100ml,称取琼脂到场400ml置于大烧杯中加热时不断搅拌,十分钟后琼脂溶解,呈透明状即可,放置稍凉。
    溶解好的琼脂溶液中到场第1项中所取出的各物质及粮溶液100ml,不断搅拌使培养基混合均匀。
    用PH计或试纸测PH值,用INNaOH或INNCL调至5.8。

    将配制好的培养基分装于清洗干净,烘干后的三角瓶中,培养基高度约1cm左右,琼脂约在40度时才凝固,所以有充足的时间业分装。

    将分装好的培养基的三角瓶中塞上棉塞,大小要合适,然后包上牛皮纸,用橡皮盘扎紧。牛皮纸上标以记号准备灭菌。
    培养基的灭菌与保存。
培养基内含有丰富的营养物质,有利于细菌和真菌繁殖,所以培养基配好后要及时灭菌,用高压锅灭菌注意以下几点:
(1) 查抄锅内的水量,一般高度到支撑锅座水平即可。
(2) 盖好锅盖,拧紧螺旋,然后查抄排气阀是事通畅。
(3) 用煤气灶或电炉加热,当气压指针上升至6时,放一次气或打开放气阀,加热至锅内冒出大量热气,以排尽锅内空气。
(4) 高压锅内温度达1200C,0,1Mpa压力时,这时保持高压来菌20分钟,以后切断电源,是锅内压力自然慢慢下降,也可缓缓打开放气阀放气,使锅内压力接近于0(气压表指针下降至0),这时完全打开放气阀。
(5) 打开锅盖,取出培养基、灭菌水、培养皿、滤纸等。灭过菌的培养基通常置于100C下保存,待培养基放置2—3天后,瓶内水吸取干后即可使用。培养基灭菌后不宜久放,一般不超过一个月,大都情况灭菌后两周内使用完。
    接种——胡萝卜愈伤组织的培养。
接种,是指经过消素好的材料在无菌的情况下切成小块(外植体)并放入培养基的过程,要在无菌的环境中进行。接种进要求无菌操作,所有接种材料要预选消毒。
    提前15分钟将超净工作台打开过滤空气。
    双手用肥皂洗净,以70%乙醇棉擦试一遍。
    取已洗净的胡萝卜5cm切段,用70%亿醇浸炮30秒。然后无菌水冲净,再2%安替福氏浸炮15秒,无菌水冲洗3——4遍置培养皿中。
    在培养皿中用打孔器取下胡萝卜的韧皮部切段,切去两端,将材料切成厚3mm的薄片。
    接种,用镊子将材料薄片迅速接入培养基中,在酒精灯上移动着烧一下瓶口,塞上棉花塞。

    培养,接好种的培养基,放置温度23——28℃光照1000——5000LuX,光照时间每天约16——18小时的人工气候箱中进行培养。随着培养组织的不断生长和细胞分裂,不久即形成愈伤组织并开始
    植株诱导和转载
     除一些基尖,侧牙球茎之类的材料能直接培养长大志植物外,叶,茎段,花瓣等要经过一个脱分化和再分化的过程,才能长成植株。
     由于到场培养基中各种激素的比例不同,外植本可以沿着不同方向分化;一种是先由外植本产生愈伤组织,有愈伤组织再分化出不字根或不定芽,也可以由愈伤组织产生胚状体,再发育成小植株:另一种是不经愈伤组织,可直接诱导出胚状全而发育成植物。
不同来源的外植体再生植株的途径
    胡萝卜肉质根诱导产生了愈伤组织之后,需进一步转移至分化培养基诱导产生根和芽,以获得再生植株。
    生长点、侧芽、原球茎、胚状体根、茎段、叶、花芽、花瓣、胚状体愈伤组织;再分化的芽和根;试管苗。

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