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常规培养基的制备、灭菌与消毒

发表时间:2020-07-25  |  点击率:547

一、实验目的

      清楚培养基的配制原理,了解配制培养基的常用方法和步骤,认识常见灭菌、清毒基本原理及方法,掌握过滤除菌、高压蒸汽灭菌及干热灭菌的操作方法。
二、实验原理

       培养基是人工按比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为水、无机盐、氮源、碳源和生长因素。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有多种不一样的种类和配制方法。蛋白胨培养基是一种应用广泛和普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。干热灭菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

三、器材与试剂

      1.器材 :试管、玻璃棒、培养基、牛角匙、分装器、三角瓶、烧杯、量筒、天平、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、镊子、麻绳、棉花、牛皮纸、记号笔、纱布、培养皿、干热灭菌箱、注射器、吸管、微孔滤膜过滤器等。
      2.试剂 蛋白胨、NaCl、琼脂
四、实验步骤
      1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

      2.干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

      3.高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

      4.过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
五、关键步骤及注意事项

     1.要严格按配方配制。

     2.调pH不要过头。

     3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,60ºC以下放物、取物。

     4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后先排除冷空气,降压回零后取物。

     5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存。

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