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研究T细胞产生的细胞因子的3种方法

发表时间:2021-07-13  |  点击率:130

1)研究细胞因子mRNA的方法

绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在,其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以,在大多数情况下,细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。
检测细胞因子mRNA的试验主要有:竞争性聚合酶链反应、Northern印迹杂交、斑点杂交、逆转录聚合酶链反应、原位杂交。

2)研究细胞因子的免疫检测法

免疫检测法主要有放射免疫检测法、酶免疫测定法、免疫荧光测定法和免疫发光测定法等。

3)研究细胞因子的生物学方法

1.用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液培养HT2细胞。取对数生长期细胞,用 细胞培养 液洗涤细胞2次,每次离心1000×g 10分钟。
2.取96孔细胞培养液,每孔加0.1ml含4×103 HT2细胞的细胞培养液。再加0.1ml T 细胞培养 上清液或经系列稀释的IL-2标准品,每个稀释度重复3孔。在37℃ 5% CO2的饱和湿度二氧化碳培养箱中培养24小时。
3.每孔加10μCi(3.7×105Bq)[3H]脱氧胸苷(10μl),在37℃ 5% CO2的饱和湿度二氧化碳培养箱中继续培养4~8小时。
4.用多孔收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上,在液体闪烁计数仪中计数每分钟放射活性(cpm)。用cpm对稀释度作图,根据标准曲线判定T 细胞培养 上清液中IL-2的含量。

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