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靶细胞杀伤实验:LDH法

发表时间:2021-07-13  |  点击率:157

一、效应细胞的制备

 

激惹5天后,于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋趋承,100目钢网研磨,调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。

 

二、靶细胞的制备

 

P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养,调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×105/ml(加入α-Lyt2 mAb时的靶细胞浓度),台盼蓝染色成活率>95%。

 

三、LDH释放法测定CTL的功能

 

按表1加样于96孔培养板中,设3个复孔。混匀置二氧化碳培养箱中孵育4h。室温离心,用微量加样器每孔取上清液100μl,送全自动生化分析仪测定每孔的LDH含量。

 

表1 LDH释放法测定CTL活性的加样情况(μl)

分组效应细胞靶细胞α-Lyt2 mAb1% Triton X-100完全培养基
自然释放孔 100  100
最大释放孔 100 100 
实验孔1100100   
实验孔2100 60①40  

 

 

注:靶细胞浓度为3.33×105/ml

四、计算CTL活性

特异杀伤率(%)=(实验孔LDH值-自然释放孔LDH值)/(最大释放孔LDH值-自然释放LDH值)

 

五、统计学处理

DTH的测定,4组间比较采用方差分析,两组比较采用q检验。对于CTL的特异杀伤率,先进行百分数的平方根反正弦转换后采用方差分析进行4组间比较,两两比较采用q检验。

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