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使用霉菌培养箱完成对SD大鼠热应激模型的制作

发表时间:2021-07-20  |  点击率:243

中国南方普遍发生的高温又使这一疾病受到更多重动物模型是研究疾病的有力工具,国内针对大鼠热应激模型的制作方法和程序的报道很少,而以其为检测工具的报道很多,而且控制条件和方法不尽相同,冷雪等选用180~200g雄性Wistar大鼠,温度38℃,相对湿度80%,热攻击1h,最终以肛温、心电图等评价;高峰等“选用SD大鼠,温度44℃,热攻击2h,最后检测血清GSH-Px、MDA、IL-2等活性或含量鉴定:陈琦等亦选用SD大鼠,温度41℃,相对湿度60%,热攻击2h,最后按照行为变化和肝脏Hsp70表达量鉴定。

以上报道的大鼠热应激模型制作手段和评价方法差异较大,娜琴等认为应激动物模型尚无统一标准,建议评价指标为行为学变化和尝试室相关检测指标,并认为Hsp70变化是主因。本研究模拟热应激自然发生的因素,结合前人经验以及大鼠自身的生理特点,试图创立比较合理的大鼠热应激模型,以行为变化、剖检变化、血清酶活性、抗氧化指标和肝脏Hsp70表达量为标准进行验证,本期为大鼠热应激模型标准化创立、体温调究、节相研关热性病的预防和治疗提供参考。


材料与方法

材料

尝试动物SD大鼠20只,雄性,清洁级,体(205g*60)g,2009-0004J,按照国家尝试动物环境标准(GB14925-2010)◎养。.L.1.2试及设备Na离子试盒、K*离子试剂盒、白白试剂盒、总蛋白试制盒,碱性磷酸试制盒、谷丙转氨试剂盒、肌酸请酸肌试剂盒、乳脱氢试剂盒、谷草转氨酶试剂盒、再二试剂盒、超氧化物线化酶测试盘。霉菌培养箱。pH530型pH测定仪

方法

精智分组及模型复制SD大鼠随机分为两组,组为一对照组,二组为模型组。一组在22℃屏障系境统内正常饲环养,二组参考部分文献*气*,模,置霉菌培养箱内升温饲养,温度为40℃,湿度为50%,2h后自霉菌培养箱取出,行为评价后眼底静脉丛采血,分离血清后检测相关指标。

生理生化指标测定血清[K]、血清[Na]、血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血红蛋白(HB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸磷酸肌酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的测定,均按试剂盒说明书进行。

肝脏HSP70表达量测定用裂解液处理2.0g肝脏组织块,常规方法提取总蛋白,BCA法测蛋白浓度,用10%的SDS-PAGE以70V/120V恒定电压电泳,电泳结束转至PVDF膜,TBST37℃封闭1h,先后到场HSP70兔抗鼠多克隆抗体和GAPDH鼠抗单克隆抗体,4℃孵育12h;HSP70经过TBST洗涤后到场HRP标记的山羊抗兔IgG,37℃孵育1h,TBST再次洗涤,ECL化学发光试剂显影检测:GAPDH4℃孵育后直接以ECL化学发光试剂显影检测。HSP70相对含量以HSP70/GAPDH灰度比值表示。

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